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頂空氣相色譜系列講座（18）
人體血液中一氧化碳的分析——分光光度法定量5
三開展面對面、分光光度法
1行動力、紫外光譜法原理
CO中毒血中可能含有三種血紅蛋白： ⑴碳氧血紅蛋白（HbCO）——與CO結(jié)合的Hb求索； ⑵ 氧合血紅蛋白——與O2結(jié)合的Hb ⑶血紅蛋白——沒(méi)結(jié)合的Hb新格局。 它們?cè)?00nm~600nm范圍內(nèi)吸收光譜見(jiàn)圖-2重要作用。碳氧血紅蛋白zui大吸收峰分別在568.2nm和538nm使用；氧合血紅蛋白zui大吸收峰分別在576.2nm和542nm積極影響；血紅蛋白zui大吸收峰在555nm自動化方案。如血液含三種形式的血紅蛋白（其中的微量高鐵血紅蛋白可忽略不計(jì)），則其光譜呈現(xiàn)三種光譜的混合形越來越重要。如在血液中加入還原劑（連二亞硫酸鈉或硫化銨）溶液線上線下，則可將氧合血紅蛋白及高鐵血紅蛋白還原為血紅蛋白，而碳氧血紅蛋白不被還原醒悟，因而血液中只存在碳氧血紅蛋白和血紅蛋白兩種不同的形式數據顯示，它們的吸收光譜見(jiàn)圖-1
用分光光度法測(cè)定血中HbCO定性和定量是基于HbCO和對(duì)光譜的特征吸收不同，和特征吸收與濃度有量的關(guān)系也逐步提升。HbO2在589nm~577nm和556nm~536nm區(qū)間有兩條吸收譜帶記得牢，其zui大吸收是579nm和542nm。HbCO在579nm~564nm和548nm~530nm區(qū)間有兩條吸收譜帶重要的作用，其中zui大吸收是572nm和539nm更多可能性。加入還原劑后檢血中HbO2和高鐵血紅蛋白被還原為血紅蛋白（Hb），此時(shí)吸收譜帶變?yōu)橐粭l足夠的實力，即在530nm~580nm之間緊迫性，zui大吸收為556nm。而HbCOzui大吸收波長(zhǎng)仍是572nm和539nm不變更適合。
2高效、具體操作步驟
取CO中毒心血（檢材血）0.1ml~0.3ml，加10ml 0.1%硫化銨或多硫化銨水溶液（內(nèi)含連二亞硫酸鈉2.5mg/ml）稀釋混勻高質量發展，測(cè)定500nm~600nm之間的吸收?qǐng)D譜便利性，用切線(xiàn)法量取555nm和540nm處的吸收值見(jiàn)圖-2，計(jì)算血中HbCO% = F ×（A540/B555）×100公式重要平臺，式中F為常數(shù)1.5深刻認識；A540見(jiàn)圖-2中a~b（cm）線(xiàn)段長(zhǎng)；B555見(jiàn)圖-2中c~d（cm）線(xiàn)段長(zhǎng)應用提升。此法適合檢材血中含量HbCO% > 40% 時(shí)效果好主動性，此方法在辦案中使用較多創造性。
3、另一種經(jīng)驗(yàn)方法
適合各種CO濃度檢材血的HbCO%測(cè)定道路，用0.4%氨水溶液稀釋的含CO血在529nm和582nm處有吸收峰規模設備，稀釋液做參比。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式：HbCO% = （A529－A582）×185/（A529－0.07）進(jìn)行計(jì)算指導。185和0.07均為經(jīng)驗(yàn)常數(shù)競爭力，本方法要求稀釋檢材血的吸光度值在0.4~0.6范圍準(zhǔn)確度高。
